Кое мл что это

Бактериальный вагиноз
Морфотипы Gardnerella vaginalis во влагалищном мазке, под микроскопом.
МКБ-10	B 96 96. , N 76 76.
МКБ-9	616.1 616.1
MeSH	D016585

Гарднереллёз (бактериальный вагиноз) — это инфекционное невоспалительное заболевание, характеризующееся резким снижением или отсутствием лактофлоры и её заменой на полимикробные ассоциации анаэробов и гарднереллы, концентрация которых достигает 10 9 —10 11 КОЕ/мл ГЭ/мл [1] вагинального отделяемого. Многообразие различных микроорганизмов, участвующих в возникновении бактериального вагиноза, объясняет термин «бактериальный», а в связи с отсутствием в отделяемом влагалища лейкоцитов — клеток, ответственных за развитие воспалительной реакции, произошло изменение термина «вагинит» на термин «вагиноз».

Содержание

Этиология [ править | править код ]

У здоровых девушек и женщин 16-40 лет ведущее место в вагинальном биоценозе занимают лактобактерии, имеющие историческое название «палочки Додерлейна». Они занимают более 95 % всей микрофлоры влагалища.

Кроме лактобактерий, в состав влагалищной микрофлоры входят более 300 микроорганизмов, которые составляют оставшиеся 5 %. В состав нормальной микрофлоры влагалища могут входить всевозможные микроорганизмы (Таблица 1).

Таблица 1. Видовой состав нормальной микрофлоры влагалища женщин репродуктивного периода.

Грамположительные палочки	Lactobacillus spp., Corynebacterium spp., Eubacterium spp., Bifidobacterium spp., Propionibacterium spp., Clostridium spp.
Грамотрицательные облигатно анаэробные палочки (14-55%)	Bacteroides spp., Fusobacterium spp., Prevotella spp., Porphyromonas spp., Leptotrichia spp.
Грамположительные кокки (30-80%)	Peptostreptococcus spp., Peptococcus spp., Staphylococcus spp., Micrococcus varians, Enterococcus spp., Streptococcus viridans и др.
Грамотрицательные кокки	Veilonella spp., Acidominococcus fermentans, непатогенные Neisseria spp. (не gonorrhoeae)
Энтеробактерии	Echerihia coli, Klebsiella spp., Enterobacter spp., Citrobacter spp. и др.

Колонизируя слизистую влагалища, лактобациллы принимают участие в формировании экологического барьера и обеспечивают тем самым резистентность влагалищной микрофлоры. Защитные свойства лактобацилл реализуются по-разному: за счет антагонистической активности, способности продуцировать лизоцим, адгезивных свойств. Однако основным механизмом, обеспечивающим устойчивость влагалищной микрофлоры, являются кислотообразование и продукция перекиси водорода. В норме вагинальное содержимое имеет кислую реакцию (рН = 3,8-4,5), возникающую в результате образования молочной кислоты (продукта метаболизма лактобактерий). При низких показателях рН влагалища происходит подавление роста патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, таких как гарднерелла, стрептококки и облигатные анаэробы.

Особенностью микрофлоры влагалища является её изменчивость под действием как экзогенных, так и эндогенных факторов. На биоценоз оказывают влияние физиологические и гормональные изменения (пубертатный период, беременность, менопауза), фазы менструального цикла, различные нарушения менструальной функции. Большое значение имеют степень половой активности, использование антибактериальных препаратов, гормонотерапия, хирургические вмешательства. При бактериальном вагинозе, развившемся в результате действия одного или сочетания перечисленных факторов, происходит существенное снижение количества лактобацилл, сопровождающееся колонизацией влагалища Gardnerella vaginalis и другими БВ-ассоциированными микроорганизмами (всего около 200 видов).

Факторы риска [ править | править код ]

1. ранее перенесенные заболевания половых органоввоспалительного характера;
2. длительный и бесконтрольный прием антибактериальных препаратов;
3. наличие различных нарушений менструального цикла;
4. наличие фоновых процессов шейки матки;
5. длительное применение ВМС с целью контрацепции;
6. применение оральных контрацептивов.

Патогенез [ править | править код ]

Патогенез бактериального вагиноза достаточно сложен. Ключевым моментом является нарушение баланса вагинальной микрофлоры под влиянием эндо- и/или экзогенных факторов, в результате чего происходит снижение плотности обсеменённости слизистой влагалища лактобактериями, которые замещаются анаэробной и факультативно-анаэробной флорой. Анаэробы продуцируют летучие жирные кислоты и аминокислоты, которые расщепляются до летучих аминов, в результате чего появляется неприятный запах выделений у пациенток с бактериальным вагинозом. Важно отметить, что при бактериальном вагинозе не наблюдается воспалительной реакции организма (нет повышения количества лейкоцитов). Важным фактором, приводящим к персистенции и рецидивированию бактериального вагиноза, является формирование биоплёнки на поверхности эпителия влагалища. Биоплёнка препятствует самостоятельному восстановлению микрофлоры влагалища; более того, показано, что у женщин с рецидивирующим бактериальноым вагинозом биоплёнка сохраняется и после лечения и элиминации клинических проявлений заболевания.

Следует отметить, что c развитием бактериального вагиноза могут быть ассоциированы более 200 видов микроорганизмов, в связи с чем выявление всех возможных бактерий не представляется возможным. Более того, в ряде исследований показано, что видовой состав микрофлоры уникален у каждой пациентки с бактериальным вагинозом. Однако наиболее распространённым маркерным микроорганизмом является Gardnerella vaginalis, выявляемая у 95-100% пациенток с бактериальным вагинозом. Gardnerella vaginalis не только самый распространённый, но и самый патогенный микроорганизм из всех БВ-ассоциированных ввиду возможности образования биоплёнки, способности к адгезии, продукции цитотоксинов (в т.ч. вагинолизина).

Клинические проявления [ править | править код ]

Основной жалобой при бактериальном вагинозе является жалоба на обильные выделения из половых путей белого или серого цвета, часто с неприятным «рыбным» запахом. Выделения усиливаются перед менструациями или после полового акта. При осмотре на зеркалах эти выделения часто имеют пенистый характер, легко удаляются со слизистой ватным тампоном.

Другие жалобы — на зуд, нарушения мочеиспускания, боли во время полового акта — встречаются очень редко и чаще всего связаны с сопутствующими заболеваниями. У большого количества женщин с бактериальным вагинозом жалобы могут отсутствовать. Таким образом, в зависимости от наличия жалоб бактериальный вагиноз подразделяется на два варианта: бессимптомный и с клиническими проявлениями. Для бактериального вагиноза характерно рецидивирующее течение (рецидив заболевания развивается у 50% женщин вне зависимости от схемы лечения).

Диагностика [ править | править код ]

В соответствии с европейскими руководствами, для диагностики бактериального вагиноза могут применяться следующие подходы:

А. Клинические критерии (критерии Amsel):

• Гомогенные серо-белые выделения;
• рН вагинальных выделений >4.5;
• «Рыбный» запах (непосредственно выделений или при добавлении 10% КОН);
• Наличие «ключевых» клеток при микроскопии нативного препарата.

Наличие 3-х из 4-х критериев позволяет установить диагноз бактериальный вагиноз.

В. Микроскопический метод с оценкой баллов Nugent.

Баллы Nugent основаны на результатах микроскопии мазка, окрашенного по Граму, с оценкой соотношения различных морфотипов. В настоящее время этот метод считается «золотым стандартом» в диагностике бактериального вагиноза. Ответ выдается в виде баллов от 0 до 10. Нормальное состояние биоценоза влагалища констатируют при 0-3 баллах, при 4-6 баллах – промежуточное состояние, более 6 баллов – бактериальный вагиноз. При анализе не учитываются морфотипы, не связанные с бактериальным вагинозом; клиническая интерпретация промежуточных состояний затруднена.

С. Микроскопический метод в соответствии со шкалой Хэй-Айсон.

Значения шкалы Хэй-Айсон также основаны на результатах микроскопии мазка, окрашенного по Граму, но позволяют более полно отразить состояние вагинальной флоры, чем баллы Nugent, т.к. описывают не только морфотипы бактерий, ассоциированных с бактериальным вагинозом, но и другие возможные варианты нарушений микрофлоры влагалища. Ответ выдается в виде степени нарушения микрофлоры от 0 до 4.

• Уровень 0– эпителиальные клетки, бактерии отсутствуют. Указывает на недавно проведенный курс антибиотикотерапии;
• Уровень I (Норма)– нормальная вагинальная микрофлора (доминирует морфотип лактобацилл)
• Уровень II (Промежуточное состояние) – смешанная бактериальная флора; наличие лактобацилл совместно с морфотипом Gardnerella vaginalis и/или Mobiluncus;
• Уровень III (Бактериальный вагиноз)- доминирует морфотип Gardnerella vaginalis и/или Mobiluncus; малое количество или полное отсутствие лактобацилл;
• Уровень IV – грамположительные кокки; лактобациллы не определяются.

Кроме того, в мировой практике широко применяют микроскопию нативного препарата или модифицированные системы анализа мазка, разработанные для упрощения процедуры анализа.

Стоит отметить, что клинические критерии Amsel применяются в РФ достаточно редко ( Дифференциальная диагностика [ править | править код ]

• Вульвовагинальный кандидоз (молочница). При нем pH ≤4,5. Обычно эта патология не связана с измененным запахом выделений
• Инфекция, вызванная Trichomonas vaginalis. Как и в случае бактериального вагиноза, pH>4,5. Однако в отличие от женщин с бактериальным вагинозом, пациенты с инфекцией T. vaginalis часто имеют вагинит и цервицит
• Инородное тело во влагалище, в частности оставлен тампон или презерватив
• Воспалительное заболевание органов малого таза
• Инфекции, передающиеся половым путем
• Пациенты с бактериальным вагинозом могут отмечать, что их выделения пахнут особенно плохо сразу после полового акта или после месячных
• Клиническое дифференцирование между молочницей и бактериальным вагинозом может оказаться сложным, однако измерения вагинального pH сможет помочь. Для пациентов с молочницей характерно pH ≤4,5, в то время как в случае бактериального вагиноза — pH> 4,5
• Женщины с молочницей или T. vaginalis обычно жалуются на зуд или раздражение вульвы, что не является характерным для бактериального вагиноза [2]

Читайте также:  Гипоэхогенная зона с нечеткими контурами

Лечение [ править | править код ]

Стартовой терапией БВ проводится исключительно антисептиками (БЕТАДИН свечи) с целью исключения анбиотикоризистентности, после лечения не требуется дополнительное лечение пробиотиками*. Терапия комбинированными препаратами БВ должна быть двухэтапной (при условии получения результатов анализов, ). На первом этапе используются антимикробные препараты, на втором — препараты для восстановления нормальной флоры влагалища. В соответствии с мировыми и российскими рекомендациями, для лечения БВ могут использоваться

• антисептики (БЕТАДИН свечи) вагинально.

• комбинированы препараты (тержинан) вагинально
• препараты 5-нитроимидазолового ряда (метронидазол, орнидазол, секнидазол и др.) вагинально или перорально.
• клиндамицин (вагинально или перорально).

Вне зависимости от используемой схемы лечения рецидивы развиваются примерно у 50% пациенток.

Другие препараты (в том числе, содержащие лиофилизированные лактобактерии) не имеют доказанной эффективности, а потому не входят в основные рекомендации и руководства по лечению бактериального вагиноза.

Более перспективным направлением лечения являются вагинальные пребиотики, стимулирующие рост вагинальной лактофлоры, которые не содержат чужеродной лактофлоры, а наоборот способствуют росту собственной лактофлоры определенной женщины. Всё большую популярность набирают препараты, содержащие молочную кислоту.

Известно, что микроорганизмы, невзирая на свой «малый рост», тоже имеют пищевые «пристрастия», температурный оптимум, в общем, среду, которая им идеально подходит, где они чувствуют себя комфортно и хорошо, а поэтому начинают интенсивно размножаться и расти.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия. Подобную задачу решает бак посев, который часто не спешат назначать, ссылаясь на то, что, например, уреа- микоплазмы медленно культивируется, а стоимость анализа немалая. Однако ведь и здоровье того стоит!

Для питания и дыхания нужны условия

Микробиологи нынче знают, что каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

пример роста микроорганизмов после бак-посева в питательную среду

Некоторые среды (тиогликолевая, Сабуро) подходят для широкого круга микроорганизмов и называются универсальными. Другие же предназначены только для определенных видов, например, пневмококк и золотистый стафилококк, продуцирующие гемолизины, растут на кровяном агаре, который служит для выделения особо «капризных» и, вместе с тем, опасных штаммов. Таким образом, разновидностей сред множество, где каждая из них выращивает свой круг микроорганизмов.

Цель культивирования микроорганизмов и значимость ее для диагностики

Кроме воды, воздуха, почвы, содержащие в тех или иных концентрациях различные микроорганизмы, в том числе и приносящие болезнь (патогенные), многие отрасли медицинской науки интересуют микробы, живущие на коже и слизистых человеческого организма, которые могут быть представлены:

• Постоянными обитателями, не несущими никакой опасности человеку, то есть, нормальной микрофлорой организма, без которой мы просто жить не можем. Например, исчезновение бактерий, живущих в кишечнике и участвующих в процессе пищеварения, приводит к дисбактериозу, лечить который – дело непростое. Так же происходит и с исчезновением вагинальной микрофлоры. Ее тут же заселяют условно-патогенные микроорганизмы, гарднереллы, например, которые вызывают бактериальный вагиноз (гарднереллез);
• Условно-патогенной флорой, которая приносит вред лишь в больших количествах при определенных условиях (иммунодефицит). Вышеназванная гарднерелла – представитель такого типа микроорганизмов;
• Наличием патогенных микробов, которые в здоровом теле не присутствуют. Они чужды человеческому организму, куда попадают случайно при контакте с другим (больным) человеком и вызывают развитие инфекционного процесса, порой, довольно тяжелого или даже смертельного. Например, встреча с возбудителями сифилиса – еще куда ни шло, на первых порах лечится, а вот (упаси Бог!) выпустит на волю холеру, чуму, черную оспу и др.

К счастью, многие из них побеждены и в настоящее время находятся «за семью печатями» в специальных лабораториях, однако человечество в любой момент должно быть готово к нашествию невидимого врага, способного уничтожить целые народы. Бактериологический посев в подобных случаях играет, пожалуй, главную роль в идентификации микроорганизма, то есть, определении рода, вида, типа и т.д. (токсономическое положение), что очень важно для диагностики инфекционных процессов, в том числе и заболеваний, передающихся половым путем.

Таким образом, методы посева, как и питательные среды, бывают разными, тем не менее, цель у них одна: получить чистую культуру без посторонних примесей в виде микробов других классов, которые обитают повсеместно: в воде, в воздухе, на поверхностях, на человеке и внутри его.

Когда назначается бак посев и как разобраться в ответах?

Название микроорганизма и его количество

Бактериологический анализ пациенты сами себе не назначают, это делает врач, если у него есть подозрения, что проблемы больного, предъявляющего различные жалобы, связаны с проникновением в организм патогенного возбудителя или с усиленным размножением микроорганизмов, постоянно живущих с человеком, но проявляющих патогенные свойства только в определенных условиях. Сдав анализ и через некоторое время получив на руки ответ, человек теряется, а порой и пугается, увидев непонятные слова и обозначения, поэтому, чтобы этого не произошло, хочется дать краткое разъяснение по данному вопросу:

1. Первым пунктом заключения, как правило, стоит название возбудителя на латинском языке, например, Escherichiacoli. Это – кишечная палочка, она является естественным обитателем кишечника и в допустимых количествах никакого вреда не приносит;
2. Следующий пункт – концентрация микроорганизма. Е.coli– обильный рост (1х10^ 6 и более) норма – менее 1x10^ 4 ;
3. Далее – патогенность: флора условно-патогенная.

При исследовании биологического материала на присутствие патогенных микроорганизмов ответ может быть отрицательным или положительным («плохой бак посев»), поскольку организм человека является для них лишь временным пристанищем, а не естественной средой обитания.

Иной раз, в зависимости от того, какой материал подлежит посеву, можно увидеть количество микроорганизмов, выраженное в колониеобразующих единицах на мл (одна живая клетка даст рост целой колонии) – КОЕ/мл. Например, посев мочи для бактериологического исследования при норме дает до 10 3 КОЕ/мл всех выявленных бактериальных клеток, в сомнительных случаях (анализ повторить!) – 10 3 – 10 4 КОЕ/мл, при воспалительном процессе инфекционного происхождения – 10 5 и выше КОЕ/мл. О двух последних вариантах в разговорной речи, порой, выражаются просто: «Плохой бак посев».

Как «найти управу» на патогенный микроорганизм?

Одновременно с посевом материала в таких ситуациях производится посев микрофлоры на чувствительность к антибиотикам, который даст четкий ответ врачу – какие антибактериальные препараты и в каких дозах «испугают» «незваного гостя». Здесь тоже есть своя расшифровка, например:

• Вид микроорганизма, допустим, та же Е.coli в количестве 1х10^ 6 ;
• Название антибиотика с обозначением (S) указывает на чувствительность возбудителя к этому препарату;
• Вид антибиотиков, не действующих на микроорганизм, обозначается символом (R).

Бактериологический анализ представляет особую ценность в определении чувствительности к антибиотикам, поскольку основной проблемой в борьбе с хламидией, микоплазмой, уреаплазмой и др. остается подбор действенного лечения, не приносящего вред организму и не ударяющего по карману пациента.

Таблица: альтернативный пример результатов бак-посева с выявлением эффективных антибиотиков

Правильная подготовка к бактериологическому анализу – залог достоверного результата

Бактериологическому анализу может подвергаться любой биологический материал, взятый у человека (кожа, кровь, сперма, слизистые ротовой полости, дыхательных и мочеполовых путей, желудочно-кишечного тракта, органов зрения, слуха и обоняния и др.). Чаще всего бак посев назначают гинекологи и урологи, поэтому на нем следует несколько остановиться.

Правильная подготовка к бактериологическому посеву будет залогом правильного результата, потому что в противном случае, анализ придется сдавать заново и ждать назначенное время. Как сдать кровь на стерильность из вены – это задача медработников. От больного здесь, как правило, ничего не зависит, он просто предоставляет локтевой сгиб, а медсестра производит забор в стерильную пробирку с соблюдением всех правил асептики и антисептики.

Читайте также:  Заболевания головки у мужчин

Другое дело – моча или мазок из половых путей. Здесь пациент должен обеспечить первый этап (забор), соблюдая предписанные правила. Следует заметить, что моча женщин и мужчин несколько отличается, хотя в мочевом пузыре у обоих полов она стерильна:

• У женщин при прохождении через мочеиспускательный канал может захватить небольшое количество непатогенных кокков, хотя в целом, часто остается стерильной;
• дифтероидами;
• стафилококками;
• некоторыми непатогенными грамотрицательными бактериями, что и покажет впоследствии бактериологический анализ.

Однако, если они находятся в допустимой концентрации (до 10 3 КОЕ/мл), то пугаться нечего, это вариант нормы.

Чтобы избежать присутствия других микроорганизмов и максимально обеспечить стерильность взятого материала, перед сдачей анализа производится тщательный туалет половых органов (вход во влагалище у женщин закрывается ватным тампоном – защита от попадания отделяемого половых органов). Для анализа берется средняя порция мочи (начало мочеиспускания в унитаз, приблизительно 10 мл средней порции в стерильную баночку, окончание в унитаз). Пациентам необходимо знать: моча, взятая на посев, должна быть обработана не позднее, чем через два часа при хранении не выше 20°С, поэтому следует рассчитывать время на транспортировку.

Кроме этого материал на бак посев при необходимости берут из уретры и прямой кишки у мужчин, из уретры, прямой кишки, влагалища, шейки матки и цервикального канала – у женщин, но это происходит в медицинском учреждении, куда пациент должен прибыть. Подмывание, спринцевание и использование антисептических средств в таких случаях запрещено.

Другие вопросы, волнующие пациентов

Многие пациенты интересуются, сколько дней делается анализ. Однозначно на этот вопрос ответить нельзя, все зависит от того, какой материал подвергается исследованию и какой возбудитель нужно искать. Иногда ответ готов через 3 дня, иногда через неделю или даже дней 10 – 14, поскольку некоторые образцы требуют пересева на другую среду.

Не обходят стороной люди, направляющиеся на бак посев и вопрос о цене анализа. Примерная стоимость в Москве составляет порядка 800 – 1500 рублей. Разумеется, она может быть выше и зависит от широты спектра бактериологического поиска. Бесплатно анализ, наверное, можно сдать при беременности в женской консультации, или в поликлинике по особым медицинским показаниям.

Для беременных бак посев является обязательным, сдается 2 раза (при постановке на учет и в 36 недель), при этом, мазок берется не только из половых путей, но и со слизистых носа и зева. Объектом поиска в данном случае, кроме урогенитальных инфекций, будет золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), который в послеродовом периоде может натворить много бед (гнойный мастит и др). Кроме этого, беременным в обязательном порядке делается посев мочи, соскоба влагалищного эпителия и мазки из шейки матки и цервикального канала.

Многие женщины, перед тем как отправиться на процедуру очень боятся таких страшных слов и начинают раздумывать: «А нужно ли это? Может, не пойти». Спешим заверить, что анализы абсолютно безболезненны. Мазок из шейки матки и цервикального канала берется стерильной цитощеткой, не причиняя женщине абсолютно никакой боли, зато впоследствии бак посев из ш/м и ц/к защитит и будущую мать, и плод от возможных осложнений. Объектом поиска при беременности являются возбудители хламидиоза, уреа- и микоплазмы, дрожжеподобный грибок рода Candida (обычно это Candida albicans), трихомонады и другие условно-патогенные и патогенные микроорганизмы.

Видео: ролик-демонстрация по бак-посеву из цервикального канала

Частные случаи, особо интересные сдающим анализы

Попав в половые пути патогенные микроорганизмы, через самое короткое время осваиваются и начинают свою вредную деятельность. Например, всегда патогенные гонококки (Neisseria), являющиеся виновниками довольно неприятной болезни, называемой гонореей и относящейся к ЗППП, чувствуют себя «как дома» буквально на 3 день. Они начинают активно размножаться и смело двигаться по половым путям вверх, захватывая все новые территории. Всем известно, что гонорея нынче неплохо лечится и ее уже почти никто не боится. Но для начала ее нужно найти. Основным методом поиска этой инфекции считается бак посев, культивирование, идентификация с помощью окрашивания по Граму, микроскопия.

Найденные в мазке, взятом «на флору» из половых путей, попарно лежащие «кофейные зерна» (диплококки), не указывают на наличие венерического заболевания. Такая микрофлора влагалища часто появляется в постменопаузе и ни о чем плохом не говорит. Отобранный в нестерильных условиях на предметное стекло и окрашенный метиленовым синим или по Романовскому (цитология) мазок, не может дифференцировать микроорганизм. Он может только предположить и направить пациентку на дополнительное исследование (получение изолированной культуры).

Следует заметить, что, если соскоб со слизистых мочеполовых путей, взятый для посева на уреаплазму, является не таким уж редким явлением, то посева мочи сами врачи часто избегают, поскольку с ней работать сложнее.

Трудности в диагностике создает хламидийная инфекция, приносящая большой вред не только при беременности. Кроме этого, хламидия вызывает множество заболеваний, свойственных не только женщинам, но и мужскому населению тоже, поэтому ее сеют, культивируют, изучают, определяют чувствительность к антибактериальной терапии и, таким образом, борются с ней.

При беременности вообще без бактериологического посева трудно обойтись, поскольку многие микроорганизмы, маскируясь в цитологическом мазке, могут быть пропущены. Между тем, влияние некоторых возбудителей ЗППП на плод бывает губительным. К тому же лечить беременную женщину значительно сложнее, а назначать антибиотики «на глаз» просто недопустимо.

Методы посева

Для выделения чистых культур возбудителей на первом этапе прибегают к их посеву на соответствующие среды, который проводится в специальных (стерильных!) условиях. В основном, перенос материала на среду осуществляется с помощью приспособлений, применяемых еще в 19 века великим Луи Пастером:

• Бактериальной петлей;
• Пастеровской пипеткой;
• Стеклянной палочкой.

Конечно, многие инструменты за 2 столетия претерпели изменения, на смену пришли пластиковые стерильные и одноразовые, однако и старые не остались в прошлом, продолжая и поныне служить микробиологической науке.

Первый этап получения колоний требует соблюдения определенных правил:

1. Посев осуществляется над спиртовкой в боксе, предварительно обработанном дезинфектантами и кварцеванием, или в ламинарном шкафу, обеспечивающем стерильность в рабочей зоне;
2. Одежда медработника, перчатки и среда также должны быть стерильными, поскольку обратное мешает выделению изолированных штаммов;
3. Работать в боксе нужно быстро, но аккуратно, нельзя разговаривать и отвлекаться, при этом – необходимо помнить о личной безопасности, ведь материал может быть заразным.

Выделение штаммов и изучение чистых культур

Выделение штаммов не всегда одинаково, поскольку некоторые биологические среды, находящиеся в человеческом организме требуют индивидуального подхода, например, гемокультуру (кровь) сначала в жидкой среде (соотношение 1 : 10) немного «подращивают», поскольку кровь (неразведенная) может убить микроорганизмы, а затем, через сутки или больше, пересевают на чашки Петри.

Посев мочи, промывных желудочных вод и других жидких материалов тоже имеет свои особенности, где для получения чистой культуры, жидкость сначала следует центрифугировать (условия – асептические!), а уж затем сеять, причем не саму жидкость, а ее осадок.

Культивирование и выращивание колоний осуществляют на чашках Петри или помещают сначала в жидкую среду, разлитую в стерильные флакончики, а затем изолированные колонии еще раз высевают, но уже на скошенный агар и помещают материал на сутки в термостат. Убедившись в чистоте полученной культуры, штаммы переносят на предметное стекло, делают мазок и окрашивают по Граму (чаще всего), Цилю-Нильсену и др. и для дифференцировки изучают морфологию микроба под микроскопом:

• Размер и форму бактериальной клетки;
• Наличие капсул, жгутиков, спор;
• Тинкториальные свойства (отношение микроорганизма к окрашиванию)*.

*Читатель, вероятно, слышал о таком возбудителе, как бледная трепонема? Это – возбудитель сифилиса, а ее название (бледная) поэтому и появилось, что она плохо воспринимает краски и остается слегка розоватой при окрашивании по Романовскому. Микроорганизмы, невоспринимающие анилиновые красители называются грамотрицательными, а воспринимающие – грамположительные. Грамотрицательным бактериям придают розовый или красный цвет при окраске по Граму дополнительные красители (фуксин, сафранин).

Бак посев можно назвать древним анализом, однако его популярность от этого отнюдь не падает, хотя современная бактериология имеет возможности выделения не только штаммов, но и отдельной клетки из него, которая называется клоном. Однако для получения клона необходим специальный прибор – микроманипулятор, который в обычных лабораториях отсутствует, поскольку применяется, в основном, в научно-исследовательских целях (генетические исследования).

Бактериологический посев (бакпосев) – это микробиологическое лабораторное исследование биологического материала человека путем его посева на определенные питательные среды при определенном температурном режиме с целью выявления наличия в нем любого количества патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и дальнейшего решения задач специфического лечения.

При выделении определенных микроорганизмов проводится второй немаловажный анализ – антибиотикограмма – определение чувствительности обнаруженных патогенов к антибактериальным препаратам и бактериофагам.

Читайте также:  Воспаление придатка яичка у мужчин лечение антибиотики

Преимуществами бактериологического посева являются:

Недостатки бактериологического посева:

Показания для проведения бактериологического исследования

Применение микробиологического метода исследования достаточно широко распространено в медицинской практике, в частности, в инфекционных болезнях, гинекологии, урологии, хирургии, отоларингологии, онкологии и других. Безусловным показанием для необходимости проведения бакпосева являются любое воспалительное заболевание органов и систем организма человека, подозрение на септический процесс.

Материал для бакпосева

Для исследования забираются следующие биологические среды организма человека: носоглоточная слизь, слизь из зева, секрет бронхиального дерева (мокрота), испражнения (кал), слизь уретры, цервикального канала, секрет простаты, моча, кровь, спинномозговая жидкость, грудное молоко, желчь, содержимое кист, воспалительных очагов, раневое отделяемое.

Какие микроорганизмы можно выявить при бакпосеве

В слизи носа и зева можно обнаружить гемолитические стрептококки (Streptococcuc pyogenes, Streptococcuc agalactiae), пневмококки (Streptococcuc pneumoniae), золотистый стафилококк (Staphylococcus auereus), коринобактерии дифтерии (Corynebacterium diphtheriae), гемофильную палочку (Haemophilus influenzae типа b), менингококк (Neisseria meningitidis), листерии (Listeria).

В испражнениях пытаются выявить кишечную группу бактерий – салмонеллы и шигеллы (Salmonella spp., Shigella spp.) иерсинии (Iersiniae spp.), тифо-паратифозную группу бактерий (Salmonella typhi, Salmonella paratyphi A, Salmonella paratyphi B), условно — патогенные возбудители кишечных инфекций, анаэробные микробы, возбудителей пищевых токсикоинфекций, а также обследовать кал на дисбактериоз кишечника.

В содержимом ран, биопунктате, гнойном отделяемом можно выявить псевдомонады или синегнойную палочку (Pseudomonas aeruginosa).

Слизь урогенитального тракта обследуют на предмет наличия в ней возбудителей инфекций, передающихся половым путем – гонококка, трихомонады, грибов (Neisseria gonorrhoeae ,Trichomonas vaginalis, грибы рода Candida), уреаплазму (Ureaplasma urealyticum), микоплазму (Mycoplasma hominis), листерии (Listeria), также можно исследовать мазок на бактериальную флору.

Кровь можно посеять (обследовать) на стерильность.

Такие материалы, как грудное молоко, моча, секрет простаты, соскоб, мазок, раневое содержимое, суставная жидкость, желчь исследуют на общую обсемененность (бактериальную флору).

Что представляет собой бактериологический посев?

Материал для исследования в бактериологической лаборатории помещают (делают посев) на специальные питательные среды. В зависимости от желаемого поиска того или иного возбудителя или группы возбудителей посев производится на разные среды. Например, это может быть избирательная или элективная питательная среда (для роста какого-то одного возбудителя, рост других микробов при этом угнетается), примером которых может быть свернутая лошадиная сыворотка для выявления возбудителей дифтерии или среда с селенитом или с солями желчных кислот для обнаружения кишечных возбудителей.

Другим примером могут быть дифференциально-диагностические среды (среда Гисса), которые используются для расшифровки бактериальных культур. При необходимости с жидких питательных сред делают пересев на твердые среды с целью большей идентификации колоний.

Бакпосев. Колонии на твердой среде

Затем питательные среды помещают в термостат (специальный прибор), в котором создаются благоприятные условия (температура, влажность и др.) для роста и размножения возбудителей, в термостате среды находятся определенное время.

Далее проводят контрольный осмотр выросших колоний микроорганизмов, которые называют «культурой микроорганизмов». При необходимости проводят микроскопию материала колоний с предварительной окраской специальными красителями.

Что оценивается при контрольном осмотре? Это форма, цвет, плотность колоний, после дополнительного исследования – способность разлагать некоторые неорганические и органические соединения.

Далее проводят подсчет возбудителей. При микробиологической исследовании учитывается такое понятие, как колониеобразующая единица (КОЕ) — одна микробная клетка, способная образовать колонию, или видимая колония микробов. По КОЕ возможно определить концентрацию или количество микроорганизмов в исследуемом образце. Подсчет КОЕ проводится разными методами: подсчетом колоний под микроскопом, методом серийных разведений, секторным методом.

Правила забора биологического материала для бактериологического посева

Качество проводимого бактериологического посева во многом зависит от правильности забора материала для исследования. Нужно помнить простое правило: стерильная посуда и стерильные инструменты! Несоблюдение этих требований приведет к контаминации (внешней обсемененности материала представителями кожи и слизистых, окружающей среды, не имеющих клинического значения), что автоматически сделает исследование бессмысленным. Для забора материала используют стерильную посуду, которая выдается в самой бактериологической лаборатории на руки пациенту при амбулаторном обследовании, для забора испражнений, мочи. Из различных очагов воспаления забор проводится только стерильными инструментами (шпатели, петли, ложки) специально обученным медицинским работником (в поликлинике обычно это медсестра инфекционного или смотрового кабинетов).

Кровь и мочу собирают в сухие пробирки, остальные материалы в посуду с транспортной питательной средой.

Стерильная посуда для забора мочи и испражнений

Другое правило: забор материала до начала антибиотикотерапии! На фоне приема антибиотиков результат будет существенно искажен. Если принимали такие препараты, то прекратить их прием за 10 дней до исследования и сообщить врачу о факте приема любых антибактериальных препаратов.

Должна быть обеспечена быстрая доставка в лабораторию! Микроорганизмы могут погибнуть при высыхании, изменении кислотности. Например, кал должен быть доставлен в теплом виде.

При заборе мочи: после утренних гигиенических процедур забирается средняя порция утренней мочи в количестве 10-15 мл в стерильную посуду. Доставить в лабораторию в течение 2х часов.

При заборе мазка из зева и носа: нельзя утром чистить зубы, полоскать рот и нос дезинфицирующими растворами, пить и есть.

Забор испражнений должен производиться утром стерильной лопаточкой в стерильную посуду в объеме 15-30 гр. Недопустимо попадание в пробу мочи. Доставка в течение 5 часов. Не допускается замораживание или ночное хранение. Собирать кал без применения клизм и слабительных.

Кровь для бакпосева берется до начала антибиотикотерапии на фоне подъема температуры в стерильную пробирку в количестве не менее 5 мл (детям), не менее 15 мл (взрослым).

Мокрота собирается утром натощак в стерильный контейнер во время приступа кашля со слизью. Перед забором почистить зубы и прополоскать рот кипяченой водой. Доставить в лабораторию в течение 1 часа.

Грудное молоко собирается после гигиенической процедуры. Околососковая область обрабатывается тампоном, смоченным 70% этиловым спиртом. Первые 15 мл сцеженного молока не используются. Затем 5 мл сцеживается в стерильный контейнер. Доставить в течение 2х часов.

Отделяемое половых органов: у женщин забор проводится не ранее, чем через 14 дней после менструации, не ранее чем через 1 месяц после отмены антибиотиков, желательно в течение 2х часов не мочиться; у мужчин – не рекомендуется мочиться в течение 5-6 часов до взятия пробы.

Сроки готовности бактериологического посева

При исследовании слизи из носоглотки результат будет готов через 5-7 дней, исследование испражнений займет около 4-7 дней. При обследовании соскоба урогенитального тракта длительность исследования займет 7 дней. Посев на общую флору длится 4-7 дней. Больше всего по длительности готовится кровь на стерильность – 10 дней. Однако самый ранний предварительный результат могут дать через 3 дня.

Результат бактериологического исследования

Результатом бакпосева является как качественная оценка (сам факт наличия возбудителя в исследуемом образце), так и количественная оценка (концентрация возбудителя в материале).

Расшифровка количественного результата проводится самым простым способом. Выделяют 4 степени роста (обсемененности) микроорганизмов в исследуемом материале. Для 1 степени роста характерен скудный рост только на жидкой среде, на твердой – роста нет; для 2 степени – рост на плотной среде до 10 колоний одного вида; для 3 степени – от 10 до 100 колоний; для 4 степени – более 100 колоний.

Это важно для условно-патогенной флоры, при выявлении которой 1 и 2 степень не считают причиной болезни, это просто свидетельствует о загрязненности материала для исследования, 3-4 степени указывают на этиологию (причину) заболевания. Если выделена патогенная флора, то учитываются все без исключения выделенные колонии, то есть все 4 степени.

Антибиотикограмма

Определение чувствительности выделенного микроорганизма к тому или иному антибактериальному препарату является важной составляющей бактериологического исследования. Набор препаратов, к которому чувствителен или резистентен возбудитель, и является антибиотикограммой.

Чувствительность возбудителя – это восприимчивость к лекарственному препарату, то есть антибиотик подействует на рост и размножение микроба. Резистентность – устойчивость возбудителя к тому или иному препарату, то есть антибактериальный препарат не подействует.

Антибиотикограмма выдается в определенных единицах измерения – минимальной ингибирующей концентрации (МИК).